Investigación en Genes y Proteínas Acceso abierto

Abstracto

Purificación y caracterización de la peroxidasa del tallo de brócoli (Brassica oleracea l. var. italica)

Qurratulain Ahmad, Amna Mehmood, Zainab Saeed, Madiha Fayyaz

La actividad enzimática aumentó durante la purificación, lo que podría ejercer un efecto beneficioso sobre las plantas. Métodos y hallazgos: La purificación enzimática incluyó extracción, precipitación con (NH4)2SO4, diálisis seguida de cromatografías secuenciales con Sephadex G-75 y Sephadex DEAE A-25. La enzima purificada se caracterizó con el tiempo, la estabilidad del pH, los iones metálicos, la termoestabilidad y la cinética del sustrato se determinó utilizando guayacol como sustrato. El pliegue de purificación para la peroxidasa del tallo de brócoli purificada fue de 72,83 con un rendimiento del 1,5%. El tiempo óptimo para la actividad enzimática fue de 6 min. y permaneció estable entre pH 4 a 8 con un pH óptimo de 6 utilizando guayacol como sustrato. La enzima mostró una actividad máxima a 30 °C y permaneció estable hasta 50 °C. El valor de Km de la peroxidasa de brócoli fue de 0,35 m.mol/ml y 33 U/ml para el sustrato de guayacol utilizando el gráfico de Lineweaver-Burk y, de manera similar, utilizando el gráfico de Michaelis Menten, los valores fueron de 0,34 m.mol/ml. Los metales como Na+, Ca2+, K+, Mg2+ y Zn2+ no mostraron ningún efecto sobre la actividad enzimática.