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Abstracto

Cromatografía avanzada 2020: purificación y caracterización de péptidos antioxidantes a partir de la hidrólisis enzimática del camarón - Universidad Oceánica Xueqin Liu-Jiangsu

Liu Xueqin

Introducción:

Las cabezas de camarón de Penaeus kerathurus obtenidas mediante preparación mecánica se hidrolizaron con tripsina comercial (0,1%). La reacción de hidrólisis se completó mediante inactivación térmica del compuesto (95 °C) seguida de centrifugación. Los hidrolizados de proteína obtenidos se caracterizaron mediante análisis bioquímico para determinar el contenido de proteína, aminoácidos libres (FAA), nitrógeno esencial volátil total (TVB-N) y perfil de electroforesis SDS-PAGE. Se evaluaron las propiedades funcionales, como el límite emulsionante, la adsorción de grasa y la propiedad espumante. En comparación con la proteína cruda de cabeza de camarón, los resultados de la hidrólisis enzimática mostraron un aumento notable (p < 0,05) en el contenido de proteína y FAA (17,22%). El bajo nivel de tripsina utilizado en este estudio fue suficiente para solubilizar el sustrato, lo que provocó niveles considerables de contenido de proteína y TVB-N (< 6 mg/100 g), que fueron significativamente inferiores a los establecidos para productos marinos.

Los desechos de camarón son una fuente importante de astaxantina, que se presenta como un complejo con proteínas, y se sabe que los aislados proteicos, así como los carotenoides, tienen una acción antioxidante. Se realizaron estudios para mejorar la hidrólisis de los desechos de camarón utilizando una proteasa bacteriana para obtener un complejo proteico rico en acción antioxidante. Se evaluó el efecto de tres factores de proceso, a saber, la fijación del catalizador específico a los desechos, la temperatura y el tiempo de eclosión en la recuperación de carotenoides, el contenido de proteínas, el ácido tricloroacético (TCA) y la actividad de búsqueda de cloruro de difenilpicrilhidrazilo (DPPH) utilizando un esquema parcialmente factorial. El manejo de mariscos, como los camarones, genera grandes cantidades de desechos sólidos que representan alrededor del 35-45% del peso total del camarón. Estos desechos se degradan rápidamente, lo que provoca problemas biológicos. Además, como los desechos de camarón son una fuente rica de proteínas, quitina, carotenoides y catalizadores, en los últimos tiempos se ha demostrado una calidad impresionante para recuperar estos importantes componentes como productos atractivos.

La astaxantina es el carotenoide más importante presente en los desechos de los carroñeros y se presenta como estructuras de carotenoproteínas, donde los carotenoides se unen a las proteínas. La formación de complejos de carotenoides con proteínas provoca la aparición de diferentes colores en los mariscos y da solidez a los carotenoides, que de todos modos son completamente inseguros. Se han realizado esfuerzos para recuperar carotenoides de los desechos de camarón, ya sea como carotenoides o como complejos de carotenoproteínas. Se han realizado estudios sobre la recuperación de carotenoides y carotenoproteínas de los desechos de mariscos. Los carotenoides de los desechos de camarón se han recuperado mediante extracción soluble y extracción de aceite y se ha tenido en cuenta su seguridad en diversas condiciones de almacenamiento. Se descubrió que la hidrólisis enzimática de los desechos de camarón mejora la capacidad de extracción de aceite de los carotenoides. Las carotenoproteínas de los desechos de camarón se pueden confinar mediante métodos enzimáticos y de maduración. Los agentes quelantes como el EDTA y el compuesto proteolítico tripsina se han utilizado para recuperar la carotenoproteína de los desechos de camarón. La hidrólisis con tripsina de los desechos de cangrejo de las nieves seguida de la precipitación con sulfato de amonio produjo carotenoproteína con un mayor contenido de carotenoides. Los péptidos antioxidantes orgánicos de la vida marina se han convertido en un tema candente en la investigación multidisciplinaria, por ejemplo, la biomedicina actual. Se descubrió que la hidrólisis de los desechos de camarón con proteasas mejora la recuperación de carotenoides. Los carotenoides se presentan como un complejo con proteínas en los depuradores y las proteasas alteran el enlace proteína-carotenoide, aumentando así la recuperación de carotenoides. El tratamiento con proteasas mejora a largo plazo la recuperación de carotenoides cuando el objetivo es recuperar carotenoides mediante extracción con aceite o soluble. Sin embargo, si el objetivo es separar la carotenoproteína, una hidrólisis excesiva puede alterar por completo esta seguridad provocando un menor contenido de carotenoides en la capa de proteína. Por lo tanto, la hidrólisis controlada de los desechos de camarón con proteasas con un nivel de catalizador más bajo a una temperatura más baja ayudará a obtener la proteína segregada rica en contenido de carotenoides. Los desechos de camarón son una fuente importante de astaxantina, que se presenta como un complejo con proteínas, y las proteínas se unen, al igual que los carotenoides, por su capacidad para estimular la actividad celular. Se realizaron estudios para optimizar la hidrólisis de los desechos de camarón utilizando una proteasa bacteriana para obtener la proteína segregada rica en actividad celular. El efecto de tres factores de proceso, a saber, la fijación química a los desechos, la temperatura y el tiempo de crianza en la recuperación de carotenoides, el contenido de proteínas, el compuesto péptido disolvente ácido tricloroácido (TCA) y la actividad de remojo de Difenilpicrilhidrazilcloruro (DPPH), se evaluó utilizando un modelo parcialmente factorial. Un alto coeficiente de correlación (>0,90) entre las características observadas y esperadas mostró la idoneidad del plan utilizado.La recuperación máxima de carotenoides se obtuvo hidrolizando los desechos de camarón con 0,3 % de químico durante 4 h. La acción de depuración de radicales DPPH del conglomerado de carotenoproteína se vio particularmente afectada por la concentración de proteína, la temperatura y el tiempo de hidrólisis. El estudio demostró que para obtener la carotenoproteína de los desechos de camarón con un mayor contenido de carotenoides, la hidrólisis con una concentración de catalizador de 0,2-0,4 %, a una temperatura más baja de 25-30 °C hasta 4 h es ideal. Sin embargo, para obtener la liberación de proteínas con una mayor actividad antioxidante, la hidrólisis a una temperatura más alta de 50 °C, con una concentración de catalizador más alta de 0,5 % para un período más corto es aún más ideal.

Método:

Los desechos de camarón de Penaeus indicus, que incluyen la cabeza y el caparazón, se recolectaron en un mercado cercano y se trasladaron al centro de investigación en condiciones refrigeradas. El material se homogeneizó en un moldeador vertical de mesa (Robo-Coupe) antes de su uso. Se utilizó alcalasa, una proteasa bacteriana, de M/s Genencor para la hidrólisis. En esta investigación, el polvo liofilizado de cola de camarón se utilizó como material crudo y la proteasa liberada por la cepa productora de proteasas separada del material crudo de cola de camarón se hidrolizó.

Resultados:

Se descompuso un agregado de 10 g de polvo de camarón en 50 ml de agua refinada y el pH de la solución se aclimató a 6,0 utilizando HCl 1 M. Luego, se agregó la proteasa ST-1 en una proporción de catalizador a sustrato. La mezcla se crió a 50 â„ÂÆ' con agitación. Después de 6 h de eclosión, la mezcla se calentó a 100 â„ÂÆ' durante 15 min para inactivar la proteasa ST-1. Precipitación del licor: La solución se enfrió a 40 â„ÂÆ' y se lavó con un rotavapor para eliminar el agua. Luego se agregó etanol anhidro y la solución se dejó reposar durante 12 h. La disposición se centrifugó a 8000 rpm durante 15 minutos y el sobrenadante se secó al vacío para adquirir péptidos de pegamento de camarón (SP), que luego se aislaron y se purgaron mediante una sección de gel G-25.

Conclusión:

Los resultados de la prueba de la actividad de refuerzo celular indicaron que la parte tres mostró una alta actividad de prevención del cáncer; el segmento tres se recolectó y aisló mediante la etapa de fluido de alto nivel de RP-HPLC para obtener cuatro segmentos. El péptido de prevención del cáncer confinado muestra una alta actividad de búsqueda de DPPH, generalmente una gran actividad de búsqueda de radicales hidróxido y aniones superóxido. Los péptidos de refuerzo celular tienen amplias posibilidades de mejora en aplicaciones clínicas, correctivas, restaurativas y alimentarias.