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Abstracto

Separación de sustancias de origen vegetal seleccionadas mediante cromatografía de capa fina en fase inversa a velocidad de fase móvil controlada y gradiente de pH escalonado

Adrian Szczyrba, Aneta HaÅ?ka-GrysiÅ?ska*, Tadeusz H. Dzido

En la actualidad, la fitoterapia representa una de las soluciones más comunes en el tratamiento de síntomas menores y enfermedades mayores (por ejemplo, la enfermedad de Alzheimer) [1]. En la era de la investigación dinámica de nuevas sustancias biológicamente activas de origen vegetal, la cromatografía de capa fina de alto rendimiento, HPTLC, permite la separación rápida y paralela de numerosas muestras. La cromatografía planar se utiliza fácilmente para el análisis de detección de extractos de plantas, productos medicinales a base de hierbas y nuevas sustancias obtenidas por biotransformación. Algunas de esas nuevas sustancias poseen propiedades ácido-base (por ejemplo, los alcaloides). En soluciones acuosas, pueden disociarse y presentar interacciones diversificadas de formas ionizadas y no ionizadas del compuesto con la fase móvil y la fase estacionaria. Una herramienta muy importante que afecta la selectividad y la forma de los picos/puntos de dichas sustancias es el pH. Los eluyentes tamponados se usaban comúnmente en la separación de sustancias con grupos ionogénicos mediante cromatografía en columna de alto rendimiento, HPLC, y cromatografía planar, TLC, [2][3] pero no hay ejemplos de un gradiente de pH de eluyente en cromatografía de capa fina de alto rendimiento en fase inversa, RP-HPTLC. 

Nuestro grupo de investigación propone la implementación de un prototipo de dispositivo basado en la aplicación de una pipeta móvil accionada por un mecanismo de impresora 3D para el desarrollo de cromatogramas. El dispositivo permite desarrollar cromatogramas de capa fina con gradiente de pH en un sistema de fase reversa con una velocidad de disolvente controlada sin un flujo excesivo del eluyente en la superficie de la capa adsorbente [4]. En el estudio, se ha utilizado la elución con gradiente de pH escalonado para la separación de sustancias seleccionadas que muestran propiedades básicas débiles. El uso del gradiente de pH de la fase móvil ha mejorado la selectividad de la separación y la forma de los puntos/zonas de las sustancias seleccionadas.

Se utilizaron placas cromatográficas de vidrio HPTLC RP-18W (Merck) como fase estacionaria. La fase móvil estaba compuesta por metanol y un tampón acuoso de pH apropiado en el rango de 2,5 a 10,5. Se mostrarán los cromatogramas de gradiente de pH obtenidos. Se discutirán las ventajas y desventajas de la solución propuesta.